Линейной амплифицированной ДНК секвенирование л с при ПЦР [полимеразной цепной реакции]

Линейной амплифицированной ДНК секвенирование, л. с. при ПЦР [полимеразной цепной реакции] * лінейнай ампліфікаванай ДНК секвеніраванне, л. с. пры ПЛР [полімеразнай ланцуговай рэакцыі] * linear amplification DNA sequencing or linear polymerase chain reaction s. — техника секвенирования нативной двунитчатой ДНК после ее амплификации методом ПЦР (см.). Очищенную ДНК и меченый по 51-концу секвенирующий праймер (см.) смешивают с четырьмя реакционными средами для секвенирования по Сэнгеру (см.) и добавляют Taq ДНК-полимеразу (Taq-полимераза). Реакционные смеси помещаются в амплификатор, и по заданной температурной программе осуществляется многократная денатурация и отжиг матричной ДНК и праймеров. Удлинение праймера Taq-полимеразой идет до тех пор, пока инкорпорированный дидезоксинуклеотидтрифосфат не остановит реакцию. В результате образуется серия амплифицированных фрагментов, которые могут быть разделены электрофоретически (см. Электрофорез) на специальном геле для секвенирования. Метод позволяет определять до 500 и более оснований за один цикл, не требует большого количества ДНК.